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SUPER Green I (效果同SYBR Green I)核酸染料(10,000× DMSO溶液)(电泳级)

采购热度:30 发布时间:2019/7/30

型号:PR001

价格:电议 产地:中国大陆

简单介绍:SUPER Green I (效果同SYBR Green I)核酸染料(10,000× DMSO溶液)(电泳级)

详细介绍

本品用DMSO溶解,因DMSO的熔点是18.5℃,使用前请放置到室温充分溶解。

SUPER Green I核酸染料特点

● 无毒性:属花箐类染料,容易生物降解,无致癌毒性。

● 灵敏度高:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25~100倍。

● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。

● 操作简单:无须脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。

● 适用范围广:可适用于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。

● 使用方便:对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、反转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。

● 经济:价格比银染便宜。

SUPER Green I使用方法简介

1.胶染法(用法同EB)

(1) 制胶时加入SUPER Green I 核酸染料。冷却胶至50℃左右,每100mL胶中加入3~5μL

SUPER Green I 核酸染料。

(2) 按照常规方法进行电泳即可。

注:此方法染色可以准确确定核酸片段分子量,染料用量相对较少。1mL染料大约可以做300块 100mL的胶。

2.点染法

(1) 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。

(2) 工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SUPER Green I 稀释100倍,即为SUPER Green I 工作液。SUPER Green I 工作液可以置2~8℃保存一个月以上。

(3) 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。

(4) 样品染色:向分析样品中加入SUPER Green I 工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SUPER Green I 与样品中DNA充分结合。SUPER Green I 工作液加入量为总上样量的1/5~1/10。

(5) DNA Marker染色:将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μLSUPER Green I 工作液混匀,室温放置5分钟,使SUPER Green I 与DNA充分结合。

(6) 上样、电泳:按常规操作。

注:用点染法染色时,灵敏度,染料用量最少。但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与Marker对比),建议使用胶染法。

3.泡染法

(1) 按照常规方法进行电泳。

(2) 用pH 7.0~8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000﹕1的比例稀释SUPER Green I 浓缩液,混匀,制成染色溶液。

(3) 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10~30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。

注:用泡染法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中最多的。

4.  点染+胶染法

此法结合方法1和方法2,灵敏度,对于低浓度样本比EB检测更灵敏。

几种染色方法特点比较

1.png

SUPER Green I使用注意事项

(1) 在SUPER Green I点染法中,电泳时间不要超过2小时,否则SUPER Green I会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。

(2) 用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(与Marker对比),建议使用胶染法(方法1)。

(3) 在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SUPER Green I可以全部从双链核酸上去掉。

(4) 如果想对用 SUPER Green I 染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%~0.3% 的SDS。

(5) 在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 SUPER Green I呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。

(6) SUPER Green I对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。

 

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